Il kit di real-time PCR HHV6 DNA Quantitation (QT), codificato HHV6DNAQT.CE, è finalizzato alla determinazione quantitativa del DNA dell’herpes virus di tipo 6 in campioni umani di plasma e sangue intero. La presenza di un controllo interno (IC) di estrazione/amplificazione permette di monitorare l’intero processo.
L’utilizzo del kit è compatibile con strumenti real-time ABI 7500 Sequence Detection System® (Software SDS versione 1.3.1, Applied Biosystems™*), oppure MX3000P® (Software MxPro versione 4.01, Stratagene™***) e CFX96® (Software CFX manager versione 1.7, Biorad™**).
NTRODUZIONE
HHV6 , herpesvirus di classe beta che può essere presente in due varianti, A e B, infetta quasi il 90% della popolazione prima dei due anni di età. Esiste evidenza d’infezione da hhv6, causa di stati febbrili, in circa il 10% dei neonati con meno di 90 giorni. Le infezioni primarie nei bambini si presentano come febbre, seguita da sviluppo di exanthema subitum, anche conosciuto come roseola infantum.
Dopo l’infezione primaria, il virus latentizza nelle cellule mieloidi e rimane nell’ospite per tutta la vita. Il virus si riattiva periodicamente da questo stato latente e il DNA dell’HHV6 può essere rilevato negli adulti sani. La riattivazione nei soggetti immunocompetenti è spesso asintomatica, tuttavia in uno stato clinico immunocompromesso può portare a una serie complicanze.
RINCIPIO DEL TEST
Il kit HHV6DNAQT.CE si basa su una chimica real-time che utilizza primer e probe specifici.
Il DNA del HHV6, recuperato dal campione biologico in esame attraverso una fase di estrazione, viene amplificato utilizzando il sistema di amplificazione real-time. Il prodotto amplificato viene determinato e quantificato sulla base di una curva standard mediante probe con reporter a colorante fluorescente specifico per una sequenza genomica unica del HHV6.
Un controllo interno (IC) eterologo funge da controllo dell’amplificazione per ogni campione trattato singolarmente, con l’obiettivo di identificare eventuali inibitori della reazione. Una curva standard è fornita per permettere la determinazione della carica virale.
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